全自動酶標(biāo)儀如今廣泛用在臨床檢驗、生物學(xué)研究、農(nóng)業(yè)科學(xué)、食品和環(huán)境科學(xué)中,特別在近幾年中,由于大量的酶聯(lián)免疫檢測試劑盒的應(yīng)用,使得它在生殖保健領(lǐng)域中應(yīng)用越來越廣泛,同時促進了生殖健康技術(shù)水平提高。
全自動酶標(biāo)儀的光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過濾光片或單色器變成一束單色光,進入塑料微孔極中的待測標(biāo)本。該單色光一部分被標(biāo)本吸收,另一部分則透過標(biāo)本照射到光電檢測器上,光電檢測器將這一待測標(biāo)本不同而強弱不同的光信號轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的電信號。電信號經(jīng)前置放大,對數(shù)放大,模數(shù)轉(zhuǎn)換等信號處理后送入微處理器進行數(shù)據(jù)處理和計算,由顯示器和打印機顯示結(jié)果。
微處理機還通過控制電路控制機械驅(qū)動機構(gòu)X和Y方向的運動來移動微孔板,從而實現(xiàn)自動進樣檢測過程。而另一些自動酶標(biāo)儀則是采用手工移動微孔板進行檢測,因此省去了X、Y方向的機械驅(qū)動機構(gòu)和控制電路,從而使儀器更小巧,結(jié)構(gòu)也更簡單。
一般來說,全自動酶標(biāo)儀使用時分為半自動和全自動兩種,不過這兩者的工作原理基本上是一致的,核心都是比色計,也就是用比色法來進行分析。
全自動酶標(biāo)儀的測定波長研究:
一般酶標(biāo)儀的測定波長在400-750nm或800nm之間,則可以滿足ELISA的顯色測定。目前國內(nèi)常見的ELISA試劑盒所使用的標(biāo)記用酶均為辣根過氧化物酶(HRP),底物通常為四甲基聯(lián)苯胺(TMB)和鄰苯二胺(OPD),其在過氧化氫溶液的存在下,經(jīng)HRP作用,分別氧化為2,2,-二氨基偶氮苯(DAB)和聯(lián)苯醌。當(dāng)pH值為5.0左右時,DAB在450nm波長處有大吸收,當(dāng)pH值降為L 0時,大吸收波長移至492 nm,同時摩爾消光系數(shù)變大,顯色加深,因而常用強酸如硫酸或鹽酸終止反應(yīng)。TMB的氧化產(chǎn)物聯(lián)苯醌在波長450nm處有大消光系數(shù),如果HRP量少,H:O:和TMB過量時,則形成藍色的陽離子根。降低pH,即可使藍色的陽離子根轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色的聯(lián)苯醌,使用硫酸作為終止劑可使產(chǎn)物穩(wěn)定90min.因此,450nm和492 nm兩個波長是目前ELISA測定常用的。
各種酶標(biāo)儀都配有放置濾光片的可自動轉(zhuǎn)換的部件,可以同時安裝6-8片濾光片,所配備的濾光片均應(yīng)包括上述兩個波長,有的酶標(biāo)儀以490nm濾光片替代492nm濾光片,影響不大。除了這兩個基本濾光片外,考慮到雙波長比色的需要,還應(yīng)有620nm或630nm或650nm和405nm波長的濾光片,其他濾光片可根據(jù)實際需要選擇。有時實驗室希望用酶標(biāo)儀作微量生化測定,故酶標(biāo)儀廠家對其生產(chǎn)時擴展了紫外檢測功能,此時需要一個340nm波長濾光片。此時,酶標(biāo)儀的測定波長范圍就成為340-750nm或800nm。